（2）幾何異構體的盐藻研究鑒定

在理論上，β-胡蘿卜素幾何異構體的国保鑒定也可以在其雙向核磁共振譜(NMR)上實現。但目前沒有文獻報道。健食进展

β-胡蘿卜素異構體的品中電子吸收光譜特不同。順式異構體的盐藻研究主吸收峰與反式異構體的主吸收峰相比，其電子吸收光譜發生“紫移”。国保同時，健食进展順式異構體在342～348nm處會出現一個特征吸收峰。品中這些光譜特征可作為判斷β-胡蘿卜素異構體的盐藻研究重要依據。

如上所述，国保由於分子在一個雙鍵處發生了順式異構，健食进展在β-胡蘿卜素的品中電子吸收光譜上342～348nm處會出現一個峰(吸收段)。這個峰被稱為“順式峰”(cis-peak)。盐藻研究分子中發生順式異構的国保部分被稱為“cis-band”。同時，健食进展與全反式異構體比較，順式異構體主吸收峰的最大吸收波長(λmax)也會發生輕度的“紫移”。圖3中的I、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ號峰的電子吸收光譜圖在λmax=342～347nm左右與全反式異構體的光譜比較可以看到有明顯的峰存在，詳見圖2；圖3為順式峰的相對高度；同時，與Ⅳ號峰的光譜比較，I、Ⅱ、Ⅲ號峰光譜主吸收峰和順式吸收峰的λmax；分別發生了5～6nm和1～4nm的“紫移”，見圖4。這些光譜特征的變化提供了將I、Ⅱ、Ⅲ號峰鑒定為β-胡蘿l、素順式異構體的證據。

（3）幾何異構體的定量測定

在C30-HPLC上，β-胡蘿卜素的幾何異構體可以獲得良好的分離。由於參比樣品的匱乏，β-胡蘿卜素順式異構體的定量需基於其電子吸收光譜範圍內的吸光係數。蒸發光散射檢測器(ELSD)的使用可以實現這個目的。在ELSD上收集β-胡蘿卜素全反式異構體信號的條件已由惠伯棣等人建立完成。使用LC-PDA-ELSD串聯係統，同步收集每個β-胡蘿卜素幾何異構體組分的電子吸收光譜和質量信號，由二者峰麵積之比推算每個組分的吸光係數，最終實現在C30-HPLC-PDA係統上β-胡蘿卜素各幾何異構體的定量檢測。最終根據其色譜峰麵積，可以準確測量出β-胡蘿卜素幾何異構體的組成。

一般情況下，用於定量分析的吸光係數是指在該化合物在λmax處的吸光係數。β-胡蘿卜素全反式異構體於450nm處的吸光係數已被報道，如A^1%_1cm。一般在2500左右。

毫無疑問，在PDA檢測器上，一種β-胡蘿卜素順式異構體的量與其在檢測波長處的色譜峰麵積呈正線性相關關係，符合朗伯-比爾定律。如果在ELSD檢測器上，這種順式異構體的量與其峰麵積間亦存在正線性相關關係，則可回歸其在PDA和ELSD上峰麵積之間的線性相關關係，並計算其斜率。最終，按下列方法估算這種順式異構體的吸光係數。

A_Z=A_E（K_Z/K_E)

其中：

A_Z=順式異構體吸光係數；

A_E=全反式異構體吸光係數；

K_Z=順式異構體斜率=PDA峰麵積／ELSD峰麵積；

K_E=全反式異構體斜率=PDA峰麵積／ELSD峰麵積；

根據朗伯-比爾定律，按下列公式計算β-胡蘿卜素異構體的含量。

x=(A×y)／(A^1％_1cm×100000)

其中：

X=樣品中所含的b，β-胡蘿卜素異構體的量(克)；

Y=樣品溶液的體積(毫升)；

A=樣品中各組分的峰麵積(毫伏·秒)，A^1％_1cm=吸光係數，為在1厘米光程長的比色杯中1％(w／v)濃度溶質的理論吸收值，計算β-胡蘿卜素全反式異構體含量時采用值為ε=2500(450nm)。

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