參照KuSada等的方法，采用結晶紫染色法分析大蒜提取物對細菌生物膜形成能力的气单群体取物影響。將細菌培養液按1∶1000的胞菌比例稀釋，加入無菌96孔板中，中介加入不同濃度的导的的干大蒜提取物（終質量濃度為0.15～1.20mg/mL），30℃靜置培養24h。现象移除培養液，蒜提用無菌去離子水衝洗3次，扰作無菌風幹燥，维氏加入200μL0.1%結晶紫染色液，气单群体取物室溫染色15mIn，胞菌無菌水衝洗3次，中介加入1mL95%乙醇漂洗生物膜，导的的干將洗液於波長570nm處測定OD值。现象
參照PackIavaThｙ等的蒜提方法，利用激光共聚焦顯微鏡（cLSm）分析細菌生物膜結構的變化。將細菌培養液按1%的比例接入含1mLLB培養基的24孔板中，加入1.20mg/mL大蒜提取物和直徑為1cm的圓形蓋玻片，靜置培養24h。用無菌水輕輕衝洗玻片上未粘附的細胞，0.1%吖啶橙染色1mIn。洗去多餘的染色液，將蓋玻片置顯微鏡下觀察。該顯微鏡裝有激發波長為515～560nm的激發濾光器及60×（60倍）的油鏡，其熒光顯微鏡照片與光鏡照片均由FluovIewv5.0軟件獲得
采用實時熒光定量PcR（RT-PcR）技術。細菌活化後加入1.20mg/mL大蒜提取物培養24h，利用細菌RnA提取試劑盒提取細菌RnA。在20μL反應體係中，加入10μL2×熒光定量PcR預混體係，0.4μL10μmol/L上、下遊引物，2μLcDnA模板。PcR擴增程序為：預變性95℃3mIn，變性95℃7S，退火57℃10S，延伸72℃15S（45個循環）。相對表達量（RQ）由2-ΔΔcT方法計算得出。
參照Zhao等的方法製備無菌魚糜肉汁。冷凍魚糜解凍後，按質量比1∶1加水打漿，加熱煮沸5mIn後靜置，冷卻至室溫。用2層紗布過濾得魚糜肉汁，加入1.6g/L氧化三甲胺、40mg/LL-半胱氨酸和40mg/LL甲硫氨酸，混合均勻後於121℃高壓滅菌15mIn，得無菌魚糜肉汁。無菌條件下，在魚糜肉汁中添加不同質量濃度的大蒜提取物（終質量濃度為0.15～1.20mg/mL）。將製備好的細菌菌懸液接種至無菌魚糜肉汁中，於30℃中搖床培養48h，每間隔6h取樣，測定魚糜肉汁中TVB-n和腐胺含量變化。
TVB-n的測定參照趙丹丹等的方法，取5mL樣品，加入15mL0.6mol/L高氯酸溶液均質混勻，上清液用半自動凱氏定氮儀測定。腐胺含量的測定參照Zhao等的方法，取2mL樣品，加入25mL0.4mol/L高氯酸溶液均質混勻，上清液用丹磺酰氯衍生後用高效液相色譜分析。
運用SPSS21.0軟件和OrIgIn8.5軟件分析數據。測定結果以均值±標準差（n≥3）表示，采用最小顯著差異法（LSD）進行顯著性差異分析，顯著性水平為5%。
以根癌農杆菌為報告菌，利用平行劃線法分析維氏氣單胞菌的AHLS分子產生情況，結果見圖1。細菌產生的AHLS可通過瓊脂擴散誘導根癌農杆菌產生β-半乳糖苷酶，並分解底物X-gal產生藍色色素。由圖1可知，維氏氣單胞菌可產生AHLS類信號分子並誘導根癌農杆菌顯藍色。
根癌農杆菌對不同碳鏈長度或帶有不同基團的AHLS分子敏感程度不同，這些AHLS經TLc展開，在培養基相應的位置誘導根癌農杆菌呈現藍色斑點。根據斑點的比移值、形狀和顏色深、淺可直觀判斷AHLS的種類及相對含量。對維氏氣單胞菌的AHLS提取液的TLc分析結果見圖2。分析可知，該細菌至少產生3種AHLS分子，即：c6-HSL、c7-HSL和c8-HSL。c4-HSL與c6-HSL是目前氣單胞菌屬報道最多的2種AHLS信號分子。LI等在腐敗比目魚中分離的溫和氣單胞菌中檢測到c4-HSL、c6-HSL、c8-HSL、N-癸酰基-高絲氨酸內酯（c10-HSL）和n十二酰基-高絲氨酸內酯（c12-HSL）。本試驗在維氏氣單胞菌中檢測到側鏈上的碳原子數目為奇數的AHL信號分子，即c7-HSL。
細菌產生的AHLS分子濃度受細菌密度變化影響，不同生長階段的細菌AHLS提取液能誘導根癌農杆菌產生不同直徑的藍色圈。維氏氣單胞菌生長過程中的細菌總數與培養液PH值的變化見圖3，AHLS活性變化見圖4。分析可知，細菌培養4h時處於對數生長期初期，此時細菌分泌的AHLS可誘導根癌農杆菌顯藍色。在4～10h細菌的快速生長階段，根癌農杆菌的變色直徑不斷增大，說明AHLS的含量快速累積。在10～18h時，根癌農杆菌藍色圈的直徑最大，此時培養液中AHLS濃度最高。在18～48h，細菌處於生長穩定期，誘導報告菌變色的直徑減小，說明AHLS的濃度開始降低。研究發現，AHLS含量的減少與環境PH值升高有關。AHLS的高絲氨酸內酯環在堿性條件下結構不穩定，易解環。對細菌生長過程中培養液的PH值變化的分析表明：細菌培養18h後培養液的PH值由6.92增至8.11，培養48h時PH值達8.97。隨著細菌的生長，培養液的PH值不斷升高，AHLS開始降解，活性降低。
革蘭氏陰性菌AHLS介導的群體感應係統主要由luxRI的同源基因調控。利用PcR技術分析維氏氣單胞菌中的luxRI同源基因，結果見圖5a。分析發現2個片段序列分別為轉錄調控因子AcuR和自誘導基因AcuI，這與ＪangId等的研究結果相同，該學者首次在維氏氣單胞菌mTcc3249中檢測到AcuRI群體感應係統。此外，分析維氏氣單胞菌的氨基酸脫羧酶基因和毒力基因，結果見圖5b、5c。鳥氨酸脫羧酶基因（ODC）和賴氨酸脫羧酶基因（LDC）的檢出說明該細菌具有產腐胺和屍胺的能力，胞外酶基因（AhyB，ser，liP）的檢出說明該菌具有一定的蛋白酶活性和脂肪酶活性，鞭毛基因（flA）的檢出說明該菌具有鞭毛運動和形成生物膜的能力。
大蒜提取物對維氏氣單胞菌的最小抑菌質量濃度為2.5mg/mL（數據未顯示）。本試驗選擇低於此質量濃度的係列（0，0.15，0.3，0.6，1.2mg/mL）來研究大蒜提取物對維氏氣單胞菌群體感應的幹擾作用。
通過檢測生物報告菌根癌農杆菌的β-半乳糖苷酶活性來分析不同濃度大蒜提取物對維氏氣單胞菌產生AHLS活性的幹擾作用，結果見圖6。分析可知，隨著大蒜提取物質量濃度的增加（0～1.20mg/mL），根癌農杆菌的β-半乳糖苷酶活性不斷降低（P＜0.05）。這說明大蒜提取物對維氏氣單胞菌產AHLS活性具有顯著的抑製作用（P＜0.05），且大蒜提取物的質量濃度與其群體感應抑製活性呈明顯量效關係。大蒜提取物質量濃度為1.20mg/mL時對根癌農杆菌的β-半乳糖苷酶活性的抑製率最高，為39.6%。這可能是因為此質量濃度下維氏氣單胞菌AcuR蛋白與群體感應抑製活性物質的結合力最強，抑製了AHLS分子的轉錄表達。
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