2結果與分析

2.1基因組DNA的肠道肠埃提取

利用NanoDrop2000對提取的CMCC44841基因組DNA進行了純度測定，A260/280和A260/230分別為1.70和2.37。集聚菌菌利用qubit熒光計對提取的性大希氏EAECDNA測定了濃度為65ng/µL，提取的体和DNA能夠滿足後續全基因組測序和標準物質製備的實驗要求。

2.2全基因組測序分析結果

本研究利用二代高通量全基因組測序技術對CMCC44841進行了序列測定。标准獲得的物质基因組序列信息結果通過生物信息學分析，CMCC44841基因組大小為5.057285Mb，肠道肠埃其N50重疊大小為114319bp，集聚菌菌共121個長度從305600bp到505bp不等的性大希氏contigs，GC含量為50.6%，体和編碼區基因5173個。标准利用CGE網站KmerFinder對細菌進行種屬鑒定，物质結果顯示CMCC44841鑒定為大腸埃希氏菌（Escherichiacoli），肠道肠埃具體鑒定結果如表2所示。集聚菌菌同時利用CGE網站進行血清預測、性大希氏多位點序列分型（MLST）和毒力基因分析，CMCC44841血清預測結果為O127：H21，MLST為ST40型，攜帶毒力基因除aggR、astA、pic之外，還預測到含有aap、aar、afaD、agg3C、lpfA、ompT等毒力基因，詳見表3。CMCC44841全基因組測序數據已上傳至NCBI數據庫，序列號為SRR12278211。

2.3特征性基因PCR擴增結果

按照GB4789.6-2016的方法對CMCC44841分別進行了astA、aggR、pic特征性基因檢測。PCR擴增結果顯示提取的CMCC44841DNA分別擴增出102bp、400bp和1111bp長度片段。不同濃度DNA擴增結果如圖1所示，0.1、0.01、0.001ng/µl的DNA均有特征性基因擴增產物，選擇CMCC44841DNA凍幹小球標準物質使用時PCR的模板量≥0.1ng/µl，按照20ng/球進行DNA標準物質的製備。

2.4標準物質的均勻性檢驗結果

隨機抽取的20瓶EAEC菌體標準物質平板計數結果如表4所示。所有樣品菌落數均在103CFU數量級，數值符合正態分布。SPSS軟件單因子方差分析結果顯示，F=1.59＜F臨界值=2.137，P＞0.05。表明在顯著水平為0.05時，本次所製備的EAEC菌體標準物質組內和組間無顯著性差異，即樣品符合均勻性要求。

隨機抽取10瓶EAECgDNA標準物質，PCR產物電泳結果顯示，10個gDNA標準物質的astA、aggR、pic基因均得到清晰的擴增條帶（圖2）。

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